天天熱點！甲基化分析 診斷 什么?。谆治觯?/h1>
1、基因甲基化的檢測方法主要有以下幾種：甲基化特異性的PCR(Methylation-specific PCR，MSP)用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變；隨后設(shè)計針對甲基化和非甲基化序列的引物進行PCR。
(資料圖片)
2、通過電泳檢測MSP擴增產(chǎn)物，如果用針對處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴增片段，則說明該位點存在甲基化；反之，說明被檢測的位點不存在甲基化。
3、2、亞硫酸氫鹽測序法(Bisulfite sequencing PCR，BSP)用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，則未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變。
4、隨后設(shè)計BSP引物進行PCR，在擴增過程中尿嘧啶全部轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶，最后對PCR產(chǎn)物進行測序就可以判斷CpG位點是否發(fā)生甲基化稱為BSP-直接測序方法。
5、將PCR產(chǎn)物克隆至載體后進行測序，可以提高測序成功率，這種方法稱為BSP-克隆測序法。
6、3、甲基化敏感擴增多態(tài)性(Methylation-Sensitive Amplified Polymorphism,MSAP)MSAP是利用對DNA甲基化敏感的兩種同裂酶Hpa II和Msp I來對基因組DNA進行酶切和連接。
7、由于兩種酶能夠識別相同的限制性酶切位點，即CCGG位點。
8、當DNA序列中的CCGG位點出現(xiàn)不同程度的甲基化狀態(tài)時，會分別被這兩種酶識別，以有無產(chǎn)物的方式體現(xiàn)出來。
9、4、焦磷酸測序(Pyrosequencing)通過準確定量單個連續(xù)的CpG 位點上的甲基化頻率，焦磷酸測序能檢測并定量甲基化水平上的細微改變。
10、在序列延伸過程中，根據(jù)C和T的摻入量來定量確定單個位點的C-T比例。
11、因此，不同位點的甲基化變異就能被準確檢測。
12、由于焦磷酸測序提供了真實的序列數(shù)據(jù)，甲基化狀態(tài)也就以序列形式呈現(xiàn)。
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